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ELISA試劑盒標(biāo)本保存我有妙招!

更新時間:2021-11-16   點擊次數(shù):2538次
   ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。
  ELISA試劑盒標(biāo)本保存,在ELISA試劑盒實驗中是非常重要的,常有ELISA操作員反映在標(biāo)本保存時出現(xiàn)溶血、凝集不全、受細(xì)菌污染等現(xiàn)象發(fā)生,我公司技術(shù)員特針對相關(guān)常見問題做出總結(jié),下面我們就來看看天的內(nèi)容:搞定ELISA試劑盒方法我有妙招!
  一、標(biāo)本保存不當(dāng)
  在冰箱中保存過久的標(biāo)本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性;標(biāo)本放置時間過長(如一天以上),有時抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不可強烈振蕩。
  二、標(biāo)本溶血
  由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中,會導(dǎo)致非特異性顯色,ELISA試劑盒干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用,標(biāo)本采集時必須注意避免溶血。
  三、標(biāo)本凝集不全
  在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開始凝固,18~24h*凝固。臨床檢驗工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;這類情況于次日復(fù)查時因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴楸苊馍鲜龈蓴_作用,解決的辦法好是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/div>
  四、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
  抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
  五、標(biāo)本受細(xì)菌污染
  因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
  做好了ELISA試劑盒因素和操作因素之后,確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性就容易的多了。
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