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青霉素殘留elisa試劑盒操作流程

更新時(shí)間:2020-06-11   點(diǎn)擊次數(shù):2001次
   青霉素殘留elisa試劑盒可用于定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織(肌肉、肝臟、魚、蝦等)、蜂蜜、牛奶、奶粉、冰淇淋、奶油和疫苗樣本中青霉素的殘留量。
  試驗(yàn)原理:本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法,在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中殘留的青霉素和酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗青霉素的抗體,加入酶標(biāo)二抗后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光度值與其所含殘留物青霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較,再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣本中青霉素的殘留量。
  青霉素殘留elisa試劑盒操作流程如下:
  (1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
  (2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
  (3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
  (4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
  (5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  (6)洗板,同(4)。
  (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
  (8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  (9)洗板,同(4)。
  (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
  (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
  (12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
  (13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
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